檢測(cè)試劑盒在實(shí)際測(cè)定操作中要注意以下幾點(diǎn)
檢測(cè)試劑盒原理，DNA包被特殊處理帶有高DNA親和性的微孔板上，8-OHdG通過(guò)捕獲抗體和檢測(cè)抗體來(lái)檢測(cè).通過(guò)酶標(biāo)儀可以檢測(cè)結(jié)果.大量得8-OHdG與光密度值成比例。
檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
實(shí)驗(yàn)原理：本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ELISA法。向預(yù)先包被了抗體的酶標(biāo)孔中加入樣本，再加入生物素標(biāo)記的識(shí)別抗原，在三十七度下孵育三十分鐘，兩者與固相抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合形成免疫復(fù)合物，經(jīng)PBST洗滌除去未結(jié)合的生物素抗原，然后加入親和素-HRP，親和素-HRP與生物素抗原結(jié)合，洗滌后結(jié)合的HRP催化TMB成藍(lán)色，隨后在酸的作用下轉(zhuǎn)化成黃色，在一定波長(zhǎng)下有吸收峰，吸光值與樣本中抗原的濃度成負(fù)相關(guān)。
檢測(cè)試劑盒具有敏感性高，特異性強(qiáng)，快速等特點(diǎn)，目前廣泛應(yīng)用于農(nóng)獸藥、真菌殘留檢測(cè)，該方法從加樣、洗板、顯色到讀數(shù)步驟繁多，其中任何一步控制不好都可能影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，在實(shí)際測(cè)定操作中要注意以下幾點(diǎn)。
1.試劑盒回溫
檢測(cè)試劑盒為冷藏(2℃-8℃)保存。從冰箱拿出來(lái)后，先不要急于打開(kāi)試劑盒，要等試劑盒的溫度平衡至室溫且試劑盒盒表面無(wú)冷凝水，檢測(cè)所用的試劑需充分混勻且*溶解后再用，提前1~2小時(shí)取出試劑盒，放在室溫中；或在預(yù)設(shè)25℃恒溫培養(yǎng)箱中平衡30分鐘~60分鐘。
2.環(huán)境溫度的控制
1)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備溫濕度表，且確保定期計(jì)量。
2)根據(jù)天氣情況設(shè)定實(shí)驗(yàn)室空調(diào)制冷或加溫功能，待室溫穩(wěn)定且無(wú)干擾的條件下再開(kāi)始檢測(cè)流程。
3)選用帶溫控裝置的孵育儀器，如恒溫孵育器、恒溫培養(yǎng)箱、多功能酶標(biāo)儀等。注意要提前開(kāi)啟預(yù)熱。
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